Mouse Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) ชุดตรวจเชิงปริมาณ (ELISA)

Mouse Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) ชุดตรวจเชิงปริมาณ (ELISA)

คู่มือผู้ใช้

【ชื่อชุดอุปกรณ์】

Mouse Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) ชุดตรวจเชิงปริมาณ (ELISA)

【การใช้ชุดอุปกรณ์】

ตรวจจับปริมาณคอลลาเจนเนส Ⅲ ในซีรั่ม พลาสมา และตัวอย่างของเหลวที่เกี่ยวข้องของหนูในเชิงปริมาณ

【หลักการตรวจจับ】

ชุดนี้ใช้การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์แซนด์วิชในขั้นตอนเดียวของแอนติบอดีคู่ (ELISA) เพิ่มสารมาตรฐาน ตัวอย่างที่จะทดสอบ และสารละลายทำงานที่มีฉลากเอนไซม์ลงในแผ่นใสที่มีฉลากเอนไซม์ที่เคลือบไว้ล่วงหน้าด้วยแอนติบอดี Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) ของเมาส์ หลังจากบ่มเป็นเวลานานพอสมควรแล้ว ให้ล้างเพื่อเอาส่วนประกอบที่ยังไม่พันกันออก เพิ่มนักพัฒนา A และ B ในทางกลับกัน นักพัฒนา (TMB) จะถูกแปลงเป็นผลิตภัณฑ์สีน้ำเงินที่เร่งปฏิกิริยาโดยฮอร์แรดิชเปอร์ออกซิเดส (HRP) และเปลี่ยนเป็นสีเหลืองภายใต้การกระทำของกรด ความเข้มข้นของคอลลาเจนเนส Ⅲ (Collagenase Ⅲ) มีความสัมพันธ์เชิงบวก วัดค่า OD ที่ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร ตามค่า OD ของมาตรฐานและตัวอย่าง ปริมาณของคอลลาเจนเนสของเมาส์ Ⅲ (Collagenase Ⅲ) ในตัวอย่างได้รับการคำนวณ

【องค์ประกอบของชุดอุปกรณ์】

1

แผ่นเคลือบเอนไซม์

12 รู × 4 แถบ

7

นักพัฒนาของเหลว

3มล

2

ผลิตภัณฑ์มาตรฐาน: 48ng / mL

0.6มล

8

นักพัฒนา B ของเหลว

3มล

3

น้ำยาซักผ้าสูตรเข้มข้น 20 เท่า

15มล

9

หยุดการแก้ปัญหา

3มล

4

การเจือจางมาตรฐาน

3มล

10

คำแนะนำ

1 เสิร์ฟ

5

สารเจือจางตัวอย่าง

3มล

11

ฟิล์มซีล

2 แผ่น

6

รีเอเจนต์ของเอนไซม์

5มล

12

ถุงปิดผนึก

1

หมายเหตุ: ผลิตภัณฑ์มาตรฐานเจือจางด้วยสารเจือจางผลิตภัณฑ์มาตรฐานตามลำดับ: 48, 24, 12, 6, 3, 1.5 ng / mL

[น้ำยาและอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้]

1. 37 ℃ เทอร์โมสตัท

2. เครื่องอ่านไมโครเพลทสเปคมาตรฐาน

3. ปิเปตที่แม่นยำและทิปแบบใช้แล้วทิ้ง

4. น้ำกลั่น

5. หลอดทดลองแบบใช้แล้วทิ้ง

6. กระดาษดูดซับ

【ขั้นตอน】

1. การเตรียมการ: ถอดชุดรีเอเจนต์ออกจากตู้เย็นและปรับสมดุลอีกครั้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที

2. สารละลายผสม: เจือจางน้ำยาซักผ้าสูตรเข้มข้น 20 เท่าด้วยน้ำกลั่นให้เป็นของเดิม

3. เพิ่มผลิตภัณฑ์มาตรฐานและตัวอย่างที่จะทดสอบ: นำแผ่นเคลือบเอนไซม์ในจำนวนที่เพียงพอมาติดเข้ากับเฟรม จัดทำหลุมมาตรฐาน หลุมตัวอย่างที่จะทดสอบ และหลุมควบคุมเปล่า บันทึกตำแหน่งของแต่ละหลุมในหลุมมาตรฐาน เพิ่ม50μLของมาตรฐาน เติมตัวอย่าง 10μL ที่จะทดสอบลงในบ่อตัวอย่าง จากนั้นเติมตัวเจือจางตัวอย่าง 40μL (นั่นคือ ตัวอย่างถูกเจือจาง 5 ครั้ง) เพิ่มสารละลายการทำงานที่มีฉลากเอนไซม์100μLลงในแต่ละหลุม ไม่มีการควบคุมที่ว่างเปล่าอย่างดี

4. การฟักไข่: ฟักในอ่างน้ำหรือเทอร์โมสตัทที่มีอุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 60 นาที

5. ล้างจาน: ทิ้งของเหลว, ซับให้แห้งบนกระดาษดูดซับ, เติมน้ำยาล้างจานแต่ละหลุม, พักไว้ 1 นาที, เขย่าน้ำยาล้างจานออก, ซับให้แห้งบนกระดาษดูดซับ, ซักซ้ำ 5 ครั้งด้วยวิธีนี้ คำแนะนำในการล้างกระดาน)

6. การพัฒนาสี: เติมสารละลายนักพัฒนา A 50 μL ลงในแต่ละหลุม จากนั้นเติมสารละลายนักพัฒนา B 50 μL และพัฒนาสีที่อุณหภูมิ 37 ° C ในที่มืดเป็นเวลา 15 นาที

7. การยุติ: นำแผ่นฉลากเอนไซม์ออก และเติมสารละลายหยุด 50μL ลงในแต่ละหลุมเพื่อหยุดปฏิกิริยา (สีจะเปลี่ยนจากสีน้ำเงินเป็นสีเหลือง)

8. การกำหนด: ทำให้รูว่างเป็นศูนย์ และภายใน 15 นาทีหลังสิ้นสุด ให้วัดค่าการดูดกลืนแสง (ค่า OD) ของแต่ละหลุมด้วยความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร

9. การคำนวณ: ตามความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์มาตรฐานและค่า OD ที่สอดคล้องกัน คำนวณสมการการถดถอยเชิงเส้นของเส้นโค้งมาตรฐาน จากนั้นคำนวณความเข้มข้นของตัวอย่างที่สอดคล้องกันในสมการการถดถอยตามค่า OD ของตัวอย่าง คุณยังสามารถใช้แอพพลิเคชั่นซอฟต์แวร์ต่างๆ ในการคำนวณได้อีกด้วย ความเข้มข้นสุดท้ายคือความเข้มข้นที่วัดได้จริงคูณด้วยปัจจัยการเจือจาง

[ข้อกำหนดตัวอย่าง]

1. ตัวอย่างต้องไม่มีโซเดียมเอไซด์ (NaN3) เนื่องจากโซเดียมเอไซด์ (NaN3) เป็นตัวยับยั้งฮอสแรดิชเปอร์ออกซิเดส (HRP)

2. ควรเก็บตัวอย่างโดยเร็วที่สุดหลังจากเก็บตัวอย่าง การสกัดควรดำเนินการตามเอกสารที่เกี่ยวข้อง ควรทำการทดลองโดยเร็วที่สุดหลังจากการสกัด หากไม่สามารถดำเนินการทดสอบได้ทันที สามารถเก็บตัวอย่างไว้ที่อุณหภูมิ -20 ℃ แต่ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ

3. ตัวอย่างควรถูกปั่นเหวี่ยงจนสุด โดยไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกและอนุภาค

【ข้อควรระวัง】

1. การทดลองดำเนินการอย่างเคร่งครัดตามคำแนะนำ และผลลัพธ์ของการทดลองจะต้องถูกกำหนดโดยการอ่านเครื่องอ่านไมโครเพลท

2. หากไม่ได้ใช้แผ่นเคลือบที่มีฉลากเอนไซม์จนหมดหลังเปิด ควรใส่ลงในถุงปิดผนึกและเติมสารดูดความชื้นทันที

3. ขอแนะนำให้ทดสอบมาตรฐาน ตัวอย่าง และส่วนควบคุมว่างทั้งหมดซ้ำกัน และใช้ค่าเฉลี่ยเพื่อลดข้อผิดพลาดในการทดลอง

4. หากสีอ่อนเกินไป สามารถขยายเวลาฟักตัวของวัสดุพิมพ์ได้อย่างเหมาะสม

5. เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม ควรเปลี่ยนส่วนควบคุมมาตรฐาน ตัวอย่าง และเปล่าด้วยปลายสำหรับแต่ละส่วนเพิ่มเติม ส่วนประกอบทั่วไป เช่น สารละลายการทำงานของเอนไซม์ สารเจือจางตัวอย่าง และสารตั้งต้น ควรเติมด้วยคานยื่น และไม่ควรสัมผัสกับไมโครเวลล์ อย่านำฟิล์มซีลกลับมาใช้ซ้ำ

6. ชุดอุปกรณ์นี้ใช้ภายในระยะเวลาการรับประกันและไม่ควรผสมรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน

7. วัสดุพิมพ์ B มีความไวต่อแสงและหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสงเป็นเวลานาน

[สรุปขั้นตอนการปฏิบัติงาน]

เตรียมรีเอเจนต์ ตัวอย่าง และมาตรฐาน

เพิ่มตัวอย่าง สารมาตรฐาน และสารละลายมาตรฐานของเอนไซม์ที่เตรียมไว้ และทำปฏิกิริยาที่ 37 ℃ เป็นเวลา 60 นาที

ล้างจาน 5 ครั้ง เติมสารละลายพัฒนาสี A และ B และพัฒนาที่อุณหภูมิ 37 ℃ เป็นเวลา 15 นาที

เพิ่มโซลูชันการหยุด

อ่านค่า OD ภายใน 15 นาที

การคำนวณ

【ช่วงสอบ】

1.5-48ng/มล

【ข้อมูลจำเพาะ】

48 เสิร์ฟ/กล่อง

【พื้นที่จัดเก็บ】

เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ป้องกันแสงและความชื้น

【ความถูกต้อง】

6 เดือน